NY∕T 3436-2019 柑橘属品种鉴定 SSR分子标记法(农业)
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ID： |
3B5EB2484274432CBE1E001967002581 |
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文件大小(MB)： |
0.99 |
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页数： |
20 |
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文件格式： |
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日期： |
2021-12-28 |
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ICS 65.020.01,B 05 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY/T 3436一2019,柑槽属晶种鉴定SSR分子标记法,Identiflcation of Citrus varieties-SSR marker method,2019-01-17 发布2019-09-01 实施,中华人民共和国农业农村部发布,NY/T 3436-2019,目次,前言………………………………………………………………………………………………………………………….. n,l 范围…………………………………………………………………………………………………………… 1,2 规范性引用文件………………………………………………………………………………………………………… 1,3 术语和定义,4 主要仪器设备及试剂.……………………………………………………………………………………….. 1,5 溶液配制……..………………………………………………………………………………………………. 1,6 引物相关信息及使用…,7 参照品种及使用…,8 操作程序………………………………………………………………………………………………………………… 1,9 结果统计………………………………………………………………………………………………………………… 3,10 结果判定..…………………………………………………………………………………………………. 3,附录A(规范性附录) 主要仪器设备及试剂…,附录B(规范性附录) 溶液配制..…………………………………………………………………………………. 7,附录α规范性附录) 核心引物名单及序列..,附录D(规范性附录〉核心引物相关信息,附录E( 资料性附录) 参照品种名单..….………………………………………………… m,I,NY /T 3436-2019,H,目U,本标准按照GBjT 1. 1-2009 给出的规则起草,请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任,本标准由农业农村部种业管理司提出,本标准由全国植物新品种测试标准化技术委员会(SACjTC 277) 归口,本标准起草单位:农业农村部科技发展中心、湖南农业大学、西南大学,本标准主要起草人:唐浩、李益、韩瑞笠、江东、邓超、马莹雪、李娜、邓子牛、赵艳杰,NY/ T 3436- 20 19,柑桶属品种鉴定SSR 分子标记法,范围,本标准规定了利用简单重复ff.:vtl CSimple sequcnce rcpcat, SSR) 标记进行芸香科C Rutaceae) 柑楠周,CCitrus L. ) 品种鉴定的操作程序、结果统计姑且机1 日l,本标准适用于柑桶屈品种SSR,2 规范性引用文件,件。凡是不注日期的寻,G?/ T 6682,NY/ T 2435,NY/ T 2594,3 术语和定义,4,5,6,7 参照晶种及使用,参!!!! 品种的名称'参见附录E ,产物,注多个品种在某一SSR 位点上可能共有相同,后，这些品种也可以代替附录D 中的参照品利'使用.,B 操作程序,8. 1 样晶准备,每份样品取不少于3 个单株的叶片或其他等效物，混合分析.,8.2 DNA 提取,应参!!自品种的PCR 扩增,31 利'ì!?位}2，等位变异大小与参照品种相同,~夺混合后的样品放入液氮预冷的研钵中，加入液氮后迅速研磨时片多次至粉末状，JjJ.适盘粉末装入,2mL 离心管。每管JJII人1 mL J:iíl热C65'C)rJiJ 2% CTA?提JtlI.液，充分混匀， 65'C 恒ìffit 7K浴45 mi n~60,NY/T 3436一2019,min ，其间每隔10min 颠倒混匀。于40C , 12 000 r/min 离心15 mino 取上清液至一新离心管，加入等体,积的氯仿-异戊醇(24 : 1, V : V) ， 轻轻颠倒混匀，静置10 min ，于40C ， 12000 r/ min 离心15 mino 取上,清液至一新离心管，加入等体积预冷的异丙醇，颠倒混匀，一200C 下静置30 min。于40C ， 12 000 r/ min,离心10 min ，弃上清液。70% 乙醇洗涤DNA 沉淀2 次，风干，加入50μL 超纯水，加1μL RNase(10 g/,L) ， 37 DC 温浴30 min; 再加入等体积的氯仿-异戊蹲(24: 1,V: V) ， 于4 DC , 12 000 r/min 离心15 min; 取,上清液，加人等体积预冷的异丙醇，颠倒混匀，一20 DC 下静置30 min; 12 000 r/ min 常温离心15 min ，弃,上清液。用70% 乙醇浸泡洗涤DNA 沉淀2 次，风干，加入100μL 无菌水或TE 缓冲液，通过紫外分光,光度计和琼脂糖凝胶电泳检测DNA 浓度和质量，一200C 保存,注:以上为推荐的DNA 提取方法，所获DNA 质量能够满足PCR 扩增要求的其他DNA 提取方法都适用于本标准.,8.3 Pα 扩增,8.3.1 反应体系,各组分终浓度如下:每种dNTP O. 20 mmol/ L ，正向、反向引物各0.25μmol/ L ， Taq DNA 聚合酶,0.05 U/μL ， lXPCR 缓冲液〈含Mg2+ 2. 5 mmol/ L) ， DNA 溶液2.5 ng/μL ，其余以超纯水补足至所需,体积,利用毛细管电泳进行荧光检测时需使用荧光标记的引物。引物标记的荧光颜色见附录D,注:反应体系的体积可根据具体情况进行调整……
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